人ELISA試劑盒檢測原理:往預(yù)先包被肥胖抑制素抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的肥胖抑制素呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度,計算樣品濃度。 人ELISA試劑盒使用規(guī)范:
1、酶標包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
2、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
3、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。
5、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
6、若顯色過淺,可適當(dāng)延長底物溫育時間。
7、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結(jié)果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果(0.1-200ng/ml范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
8、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。
9、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。